Tapadh leibh airson tadhal air Nature.com. Tha taic CSS cuibhrichte aig an dreach den bhrobhsair a tha thu a’ cleachdadh. Airson na toraidhean as fheàrr, tha sinn a’ moladh gun cleachd thu dreach nas ùire den bhrobhsair agad (no gun cuir thu dheth Modh Co-chòrdalachd ann an Internet Explorer). Aig an aon àm, gus dèanamh cinnteach à taic leantainneach, tha sinn a’ sealltainn an làraich gun stoidhle no JavaScript.
Dh’fhaodadh measgachadh de choimeasgaidhean biastagan-mharbhaidh a tha stèidhichte air planntrais eadar-obrachaidhean sineirgisteach no antagonistach a nochdadh an aghaidh plàighean. Leis cho luath ‘s a tha galairean a bhios mosgìotothan Aedes a’ giùlan air sgaoileadh agus barrachd is barrachd strì an aghaidh biastagan-mharbhaidh traidiseanta, chaidh ochd measgachadh fichead ‘s a h-ochd de choimeasgaidhean terpene stèidhichte air olan riatanach planntrais a chruthachadh agus a dhearbhadh an aghaidh ìrean larbha is inbheach Aedes aegypti. Chaidh còig olan riatanach planntrais (EOs) a mheasadh an toiseach airson an èifeachdas larbha-mharbhaidh agus cleachdadh inbheach, agus chaidh dà phrìomh cho-thàthadh a chomharrachadh anns gach EO stèidhichte air toraidhean GC-MS. Chaidh na prìomh choimeasgaidhean a chaidh a chomharrachadh a cheannach, is iad sin diallyl disulfide, diallyl trisulfide, carvone, limonene, eugenol, methyl eugenol, eucalyptol, eudesmol agus mosgìoto alpha-pinene. Chaidh measgachadh dà-chànanach de na coimeasgaidhean sin ullachadh an uairsin a’ cleachdadh dòsan fo-mharbhtach agus chaidh na buaidhean sineirgisteach agus antagonistach aca a dhearbhadh agus a dhearbhadh. Gheibhear na co-dhèanamhan larbha-mharbhaidh as fheàrr le bhith a’ measgachadh limonene le diallyl disulfide, agus gheibhear na co-dhèanamhan inbheach-mharbhaidh as fheàrr le bhith a’ measgachadh carvone le limonene. Chaidh an larbha-mharbhaidh sintéiseach Temphos a thathas a’ cleachdadh gu malairteach agus an droga inbheach Malathion a dhearbhadh air leth agus ann an cothlamadh dà-chànanach le terpenoids. Sheall na toraidhean gur e an cothlamadh de themephos agus diallyl disulfide agus malathion agus eudesmol an cothlamadh as èifeachdaiche. Tha comas aig na cothlamadh cumhachdach seo a bhith air an cleachdadh an aghaidh Aedes aegypti.
Is e metabolites àrd-sgoile a th’ ann an olan riatanach planntrais (EOs) anns a bheil diofar choimeasgaidhean bith-ghnìomhach agus tha iad a’ sìor fhàs cudromach mar roghainn eile an àite puinnseanan-bhiastagan sintéiseach. Chan e a-mhàin gu bheil iad càirdeil don àrainneachd agus furasta an cleachdadh, ach tha iad cuideachd nan measgachadh de dhiofar choimeasgaidhean bith-ghnìomhach, a tha cuideachd a’ lughdachadh an coltachd gum bi strì an aghaidh dhrogaichean ann. A’ cleachdadh teicneòlas GC-MS, rinn luchd-rannsachaidh sgrùdadh air tàthchuid diofar olan riatanach planntrais agus chomharraich iad còrr air 3,000 co-thàthadh bho 17,500 lus cùbhraidh, agus chaidh a’ mhòr-chuid dhiubh a dhearbhadh airson feartan marbhtach-bhiastagan agus thathar ag aithris gu bheil buaidhean marbhtach-bhiastagan aca. Tha cuid de sgrùdaidhean a’ cur cuideam air gu bheil puinnseanta prìomh phàirt a’ cho-thàthaidh an aon rud no nas motha na puinnseanta an ethylene oxide amh aige. Ach faodaidh cleachdadh choimeasgaidhean fa leth àite fhàgail a-rithist airson leasachadh strì an aghaidh bhiastagan, mar a tha fìor le puinnseanan-bhiastagan ceimigeach. Mar sin, is e am fòcas làithreach measgachadh de choimeasgaidhean stèidhichte air ethylene oxide ullachadh gus èifeachdas marbhtach-bhiastagan a leasachadh agus an coltachd gum bi strì an aghaidh ann an sluagh plàighean targaid a lughdachadh. Dh’fhaodadh gum bi buaidhean sineirgisteach no antagonistach aig todhar gnìomhach fa leth a tha an làthair ann an EOan ann an cothlamadh a tha a’ nochdadh gnìomhachd iomlan an EO, fìrinn a chaidh a neartachadh gu mòr ann an sgrùdaidhean a rinn luchd-rannsachaidh roimhe7,8. Tha EO agus a phàirtean cuideachd anns a’ phrògram smachd vectar. Chaidh gnìomhachd mosgìoto-mharbhtach olan riatanach a sgrùdadh gu farsaing air mosgìotothan Culex agus Anopheles. Tha grunn sgrùdaidhean air feuchainn ri puinnseanan-bhiastagan èifeachdach a leasachadh le bhith a’ cothlamadh diofar lusan le puinnseanan-bhiastagan synthetigeach a thathas a’ cleachdadh gu malairteach gus puinnseanta iomlan a mheudachadh agus fo-bhuaidhean a lughdachadh9. Ach tha sgrùdaidhean air todhar mar sin an aghaidh Aedes aegypti fhathast tearc. Tha adhartasan ann an saidheans meidigeach agus leasachadh dhrogaichean agus banachdachan air cuideachadh le bhith a’ sabaid cuid de ghalaran a tha air an giùlan le vectaran. Ach tha làthaireachd diofar serotipean den bhìoras, air an sgaoileadh leis a’ mosgìoto Aedes aegypti, air leantainn gu fàilligeadh phrògraman banachdach. Mar sin, nuair a thachras galairean mar sin, is e prògraman smachd vectar an aon roghainn gus casg a chuir air sgaoileadh a’ ghalair. Anns an t-suidheachadh làithreach, tha smachd air Aedes aegypti glè chudromach oir is e prìomh vectar a th’ ann airson diofar bhìorasan agus na serotheidean aca a dh’ adhbhraicheas fiabhras dengue, Zika, fiabhras hemorrhagic dengue, fiabhras buidhe, msaa. Is e an rud as cudromaiche gu bheil àireamh nan cùisean de cha mhòr a h-uile galar Aedes a tha air a ghiùlan le vectaran a’ dol am meud gach bliadhna san Èiphit agus tha iad a’ dol am meud air feadh an t-saoghail. Mar sin, anns a’ cho-theacsa seo, tha feum èiginneach air ceumannan smachd a tha càirdeil don àrainneachd agus èifeachdach a leasachadh airson sluaghan Aedes aegypti. Is e EOan, na co-phàirtean a tha nan co-phàirtean dhiubh, agus na measgachaidhean aca na tagraichean a dh’ fhaodadh a bhith ann san t-seagh seo. Mar sin, dh’ fheuch an sgrùdadh seo ri measgachaidhean synergisteach èifeachdach de phrìomh choimeasgaidhean EO planntrais a chomharrachadh bho chòig lusan le feartan biastagan-mharbhtach (ie, mint, basil naomh, Eucalyptus spotted, Allium sulfur agus melaleuca) an aghaidh Aedes aegypti.
Sheall na h-EOan taghte uile gnìomhachd larbha-mharbhtach comasach an aghaidh Aedes aegypti le LC50 24-uair a’ dol bho 0.42 gu 163.65 ppm. Chaidh an gnìomhachd larbha-mharbhtach as àirde a chlàradh airson EO lus an phiobair (Mp) le luach LC50 de 0.42 ppm aig 24 uair, agus an uair sin garlic (As) le luach LC50 de 16.19 ppm aig 24 uair (Clàr 1).
A bharrachd air Ocimum Sainttum, Os EO, sheall na ceithir EOan eile a chaidh a sgrìonadh buaidhean follaiseach alergidh-mharbhtach, le luachan LC50 eadar 23.37 agus 120.16 ppm thairis air an ùine nochdaidh 24-uair. B’ e Thymophilus striata (Cl) EO as èifeachdaiche ann a bhith a’ marbhadh inbhich le luach LC50 de 23.37 ppm taobh a-staigh 24 uairean bho nochdadh, agus an uairsin Eucalyptus maculata (Em) aig an robh luach LC50 de 101.91 ppm (Clàr 1). Air an làimh eile, chan eil luach LC50 airson Os air a dhearbhadh fhathast leis gun deach an ìre bàsmhorachd as àirde de 53% a chlàradh aig an dòs as àirde (Figear a bharrachd 3).
Chaidh an dà phrìomh cho-thàthadh anns gach EO a chomharrachadh agus a thaghadh stèidhichte air toraidhean stòr-dàta leabharlainn NIST, ceudad farsaingeachd cromatagram GC, agus toraidhean speactram MS (Clàr 2). Airson EO As, b’ e diallyl disulfide agus diallyl trisulfide na prìomh cho-thàthaidhean a chaidh a chomharrachadh; airson EO Mp b’ e carvone agus limonene na prìomh cho-thàthaidhean a chaidh a chomharrachadh, airson EO Em b’ e eudesmol agus eucalyptol na prìomh cho-thàthaidhean a chaidh a chomharrachadh; airson EO Os, b’ e eugenol agus methyl eugenol na prìomh cho-thàthaidhean a chaidh a chomharrachadh, agus airson EO Cl, b’ e eugenol agus α-pinene na prìomh cho-thàthaidhean a chaidh a chomharrachadh (Figear 1, Figearan a bharrachd 5–8, Clàr a bharrachd 1–5).
Toraidhean speactramaitreachd mais nam prìomh terpenoidan de dh’olan riatanach taghte (A-diallyl disulfide; B-diallyl trisulfide; C-eugenol; D-methyl eugenol; E-limonene; F-aromatic ceperone; G-α-pinene; H-cineole; R-eudamol).
Chaidh naoi todhar gu h-iomlan (diallyl disulfide, diallyl trisulfide, eugenol, methyl eugenol, carvone, limonene, eucalyptol, eudesmol, α-pinene) a chomharrachadh mar choimeasgaidhean èifeachdach a tha nan prìomh phàirtean de EO agus chaidh an deuchainn bith-eòlasach leotha fhèin an aghaidh Aedes aegypti aig ìrean larbha. Bha an gnìomhachd larbha-mharbhtach as àirde aig a’ choimeasgaidh eudesmol le luach LC50 de 2.25 ppm às deidh 24 uair a thìde de nochdadh. Chaidh a lorg cuideachd gu bheil buaidhean larbha-mharbhtach comasach aig na todhar diallyl disulfide agus diallyl trisulfide, le dòsan cuibheasach fo-mharbhtach anns an raon 10–20 ppm. Chaidh gnìomhachd larbha-mharbhtach meadhanach fhaicinn a-rithist airson nan todhar eugenol, limonene agus eucalyptol le luachan LC50 de 63.35 ppm, 139.29 ppm agus 181.33 ppm às deidh 24 uair a thìde, fa leth (Clàr 3). Ach cha deach comas mòr larbha-mharbhtach methyl eugenol agus carvone a lorg eadhon aig na dòsan as àirde, agus mar sin cha deach luachan LC50 obrachadh a-mach (Clàr 3). Bha dùmhlachd marbhtach cuibheasach de 0.43 ppm aig an larbha-mharbhtach synthetigeach Temephos an aghaidh Aedes aegypti thairis air 24 uair a thìde de nochdadh (Clàr 3, Clàr Taiceil 6).
Chaidh seachd todhar (diallyl disulfide, diallyl trisulfide, eucalyptol, α-pinene, eudesmol, limonene agus carvone) a chomharrachadh mar na prìomh choimeasgaidhean de EO èifeachdach agus chaidh an deuchainn leotha fhèin an aghaidh mosgìotothan Aedes Èiphiteach inbheach. A rèir mion-sgrùdadh ath-tharraing Probit, chaidh a lorg gu robh an comas as àirde aig Eudesmol le luach LC50 de 1.82 ppm, agus an uairsin Eucalyptol le luach LC50 de 17.60 ppm aig ùine nochdaidh 24-uair. Bha na còig todhar a bha air fhàgail a chaidh a dhearbhadh meadhanach cronail do dh’inbhich le LC50an eadar 140.79 agus 737.01 ppm (Clàr 3). Bha am malathion organophosphorus synthetigeach nas lugha cumhachdach na eudesmol agus nas àirde na na sia todhar eile, le luach LC50 de 5.44 ppm thairis air an ùine nochdaidh 24-uair (Clàr 3, Clàr Taiceil 6).
Chaidh seachd todhar luaidhe cumhachdach agus an tamephosate organophosphorus a thaghadh gus measgachaidhean dà-chànanach de na dòsan LC50 aca a chruthachadh ann an co-mheas 1:1. Chaidh 28 measgachadh dà-chànanach ullachadh agus a dhearbhadh airson an èifeachdas larbha-mharbhtach an aghaidh Aedes aegypti. Chaidh naoi measgachaidhean a lorg a bha sineirgisteach, bha 14 measgachaidhean antagonistach, agus cha robh còig measgachaidhean larbha-mharbhtach. Am measg nan measgachaidhean sineirgisteach, b’ e measgachadh diallyl disulfide agus temofol am fear as èifeachdaiche, le bàsmhorachd 100% air fhaicinn às deidh 24 uairean (Clàr 4). San aon dòigh, sheall measgachaidhean de limonene le diallyl disulfide agus eugenol le thymetphos deagh chomas le bàsmhorachd larbha de 98.3% air fhaicinn (Clàr 5). Sheall na 4 measgachaidhean a bha air fhàgail, is iad sin eudesmol plus eucalyptol, eudesmol plus limonene, eucalyptol plus alpha-pinene, alpha-pinene plus temephos, èifeachdas larbha-mharbhtach cudromach cuideachd, le ìrean bàsmhorachd air am faicinn nas àirde na 90%. Tha an ìre bàsmhorachd ris a bheil dùil faisg air 60-75%. (Clàr 4). Ach, sheall measgachadh de limonene le α-pinene no eucalyptus ath-bhualaidhean antagonistach. San aon dòigh, chaidh a lorg gu bheil buaidhean antagonistach aig measgachadh de Temephos le eugenol no eucalyptus no eudesmol no diallyl trisulfide. San aon dòigh, tha measgachadh de diallyl disulfide agus diallyl trisulfide agus measgachadh gin de na todhar sin le eudesmol no eugenol antagonistach nan gnìomh larvacid. Chaidh aithris cuideachd air antagonism le measgachadh de eudesmol le eugenol no α-pinene.
De na 28 measgachadh dà-chànanach uile a chaidh a dhearbhadh airson gnìomhachd searbhagach inbheach, bha 7 measgachaidhean sineirgisteach, cha robh buaidh sam bith aig 6, agus bha 15 antagonistach. Chaidh measgachadh de eudesmol le eucalyptus agus limonene le carvone a lorg nas èifeachdaiche na measgachaidhean sineirgisteach eile, le ìrean bàsmhorachd aig 24 uairean de 76% agus 100%, fa leth (Clàr 5). Chaidh fhaicinn gu bheil buaidh sineirgisteach aig malathion leis a h-uile measgachadh de choimeasgaidhean ach a-mhàin limonene agus diallyl trisulfide. Air an làimh eile, chaidh antagonism a lorg eadar diallyl disulfide agus diallyl trisulfide agus measgachadh gin dhiubh le eucalyptus, no eucalyptol, no carvone, no limonene. San aon dòigh, sheall measgachadh de α-pinene le eudesmol no limonene, eucalyptol le carvone no limonene, agus limonene le eudesmol no malathion buaidhean larvicid antagonistach. Airson nan sia measgachaidhean a bha air fhàgail, cha robh eadar-dhealachadh mòr sam bith eadar bàsmhorachd ris a bheil dùil agus bàsmhorachd a chaidh fhaicinn (Clàr 5).
Stèidhichte air buaidhean sineirgisteach agus dòsan fo-mharbhtach, chaidh an puinnseanta larbha-mharbhtach an aghaidh àireamh mhòr de mosgìotothan Aedes aegypti a thaghadh mu dheireadh agus a dhearbhadh tuilleadh. Sheall na toraidhean gu robh am bàsmhorachd larbha a chaidh fhaicinn a’ cleachdadh nan cothlamadh dà-chànanach eugenol-limonene, diallyl disulfide-limonene agus diallyl disulfide-timephos 100%, agus bha am bàsmhorachd larbha ris a bheil dùil 76.48%, 72.16% agus 63.4%, fa leth (Clàr 6). Bha an cothlamadh de limonene agus eudesmol an ìre mhath nas lugha èifeachdach, le bàsmhorachd larbha 88% air fhaicinn thairis air an ùine nochdaidh 24-uair (Clàr 6). Mar gheàrr-chunntas, sheall na ceithir cothlamadh dà-chànanach taghte buaidhean larbha-mharbhtach an aghaidh Aedes aegypti nuair a chaidh an cur an sàs air sgèile mhòr (Clàr 6).
Chaidh trì measgachaidhean sineirgisteach a thaghadh airson a’ bhith-aiste inbheach-mharbhtach gus smachd a chumail air sluagh mòr de Aedes aegypti inbheach. Gus measgachaidhean a thaghadh airson deuchainn a dhèanamh air coloinidhean mòra bhiastagan, chuir sinn fòcas an toiseach air an dà mheasgachadh terpene sineirgisteach as fheàrr, is iad sin carvone agus limonene agus eucalyptol agus eudesmol. San dàrna àite, chaidh an cothlamadh sineirgisteach as fheàrr a thaghadh bhon mheasgachadh de malathion organophosphate synthetigeach agus terpenoids. Tha sinn den bheachd gur e an cothlamadh de malathion agus eudesmol an cothlamadh as fheàrr airson deuchainn a dhèanamh air coloinidhean mòra bhiastagan air sgàth a’ bhàsmhorachd as àirde a chaidh fhaicinn agus luachan LC50 glè ìosal de na grìtheidean tagraiche. Tha Malathion a’ nochdadh sineirgisteachd ann an cothlamadh le α-pinene, diallyl disulfide, eucalyptus, carvone agus eudesmol. Ach ma choimheadas sinn air na luachan LC50, tha an luach as ìsle aig Eudesmol (2.25 ppm). B’ e na luachan LC50 a chaidh obrachadh a-mach airson malathion, α-pinene, diallyl disulfide, eucalyptol agus carvone 5.4, 716.55, 166.02, 17.6 agus 140.79 ppm fa leth. Tha na luachan seo a’ nochdadh gur e measgachadh de malathion agus eudesmol an cothlamadh as fheàrr a thaobh dòs. Sheall na toraidhean gu robh bàsmhorachd 100% aig measgachadh de carvone agus limonene agus eudesmol agus malathion an taca ri bàsmhorachd ris a bheil dùil de 61% gu 65%. Sheall measgachadh eile, eudesmol agus eucalyptol, ìre bàsmhorachd de 78.66% às deidh 24 uair a thìde de nochdadh, an taca ri ìre bàsmhorachd ris a bheil dùil de 60%. Sheall na trì cothlamadh taghte buaidhean sineirgisteach eadhon nuair a chaidh an cur an sàs air sgèile mhòr an aghaidh Aedes aegypti inbheach (Clàr 6).
Anns an sgrùdadh seo, sheall EOan planntrais taghte leithid Mp, As, Os, Em agus Cl buaidhean marbhtach gealltanach air ìrean larbha is inbheach Aedes aegypti. Bha an gnìomhachd larbha-mharbhtach as àirde aig Mp EO le luach LC50 de 0.42 ppm, agus an uairsin As, Os agus Em EOan le luach LC50 nas lugha na 50 ppm às deidh 24 uair a thìde. Tha na toraidhean seo a’ co-chòrdadh ri sgrùdaidhean roimhe air mosgìotothan agus cuileagan diptearous eile10,11,12,13,14. Ged a tha comas larbha-mharbhtach Cl nas ìsle na olan riatanach eile, le luach LC50 de 163.65 ppm às deidh 24 uair a thìde, is e a chomas inbheach an ìre as àirde le luach LC50 de 23.37 ppm às deidh 24 uair a thìde. Sheall EOan Mp, As agus Em cuideachd comas aileirdsidh math le luachan LC50 anns an raon 100–120 ppm aig 24 uair a thìde de nochdadh, ach bha iad an ìre mhath nas ìsle na an èifeachdas larbha-mharbhtach. Air an làimh eile, sheall EO Os buaidh aileirdsidh neo-shuntasach eadhon aig an dòs teirpeach as àirde. Mar sin, tha na toraidhean a’ nochdadh gum faod puinnseanta ethylene oxide do lusan atharrachadh a rèir ìre leasachaidh nam mosgìotothan15. Tha e cuideachd an urra ri ìre treòrachaidh EOan a-steach do chorp a’ bhiastag, an eadar-obrachadh le enzyman targaid sònraichte, agus comas dì-phuinnseanachaidh a’ mosgìoto aig gach ìre leasachaidh16. Tha àireamh mhòr de sgrùdaidhean air sealltainn gur e am prìomh cho-phàirt co-phàirteach feart cudromach ann an gnìomhachd bith-eòlasach ethylene oxide, leis gu bheil e a’ dèanamh suas a’ mhòr-chuid de na todhar iomlan3,12,17,18. Mar sin, bheachdaich sinn air dà phrìomh cho-phàirt anns gach EO. Stèidhichte air na toraidhean GC-MS, chaidh diallyl disulfide agus diallyl trisulfide a chomharrachadh mar na prìomh choimeasgaidhean de EO As, a tha a rèir aithisgean roimhe19,20,21. Ged a chomharraich aithisgean roimhe gur e menthol aon de na prìomh choimeasgaidhean aige, chaidh carvone agus limonene a chomharrachadh a-rithist mar na prìomh choimeasgaidhean de Mp EO22,23. Sheall pròifil co-dhèanamh Os EO gur iad eugenol agus methyl eugenol na prìomh choimeasgaidhean, a tha coltach ri co-dhùnaidhean luchd-rannsachaidh na bu thràithe16,24. Chaidh aithris air Eucalyptol agus eucalyptol mar na prìomh choimeasgaidhean a tha an làthair ann an ola duille Em, a tha a rèir co-dhùnaidhean cuid de luchd-rannsachaidh25,26 ach an aghaidh co-dhùnaidhean Olalade et al.27. Chaidh ceannas cineole agus α-pinene fhaicinn ann an ola riatanach melaleuca, a tha coltach ri sgrùdaidhean roimhe28,29. Chaidh eadar-dhealachaidhean intraspecific ann an co-dhèanamh agus dùmhlachd olan riatanach a chaidh a thoirt a-mach às an aon ghnè planntrais ann an diofar àiteachan aithris agus chaidh am faicinn cuideachd san sgrùdadh seo, a tha fo bhuaidh suidheachaidhean fàis planntrais cruinn-eòlasach, àm buain, ìre leasachaidh, no aois planntrais. coltas chemotypes, msaa.22,30,31,32. Chaidh na prìomh choimeasgaidhean a chaidh an comharrachadh an uairsin a cheannach agus a dhearbhadh airson na buaidhean larvicid aca agus buaidhean air mosgìotothan Aedes aegypti inbheach. Sheall na toraidhean gu robh gnìomhachd larbha-mharbhtach diallyl disulfide co-chosmhail ri gnìomhachd EO As amh. Ach tha gnìomhachd diallyl trisulfide nas àirde na EO As. Tha na toraidhean seo coltach ris an fheadhainn a fhuair Kimbaris et al. 33 air Culex philippines. Ach, cha do sheall an dà cho-thàthadh seo deagh ghnìomhachd fèin-mharbhtach an aghaidh nam mosgìotothan targaid, a tha a rèir toraidhean Plata-Rueda et al 34 air Tenebrio molitor. Tha Os EO èifeachdach an aghaidh ìre larbha Aedes aegypti, ach chan ann an aghaidh ìre inbheach. Chaidh a stèidheachadh gu bheil gnìomhachd larbha-mharbhtach nam prìomh choimeasgaidhean fa leth nas ìsle na gnìomhachd Os EO amh. Tha seo a’ ciallachadh gu bheil dreuchd aig coimeasgaidhean eile agus an eadar-obrachadh ann an ethylene oxide amh. Tha gnìomhachd neo-shuntasach aig methyl eugenol leis fhèin, ach tha gnìomhachd larbha-mharbhtach meadhanach aig eugenol leis fhèin. Tha an co-dhùnadh seo a’ dearbhadh, air an aon làimh, 35,36, agus air an làimh eile, a’ dol an aghaidh cho-dhùnaidhean luchd-rannsachaidh na bu thràithe 37,38. Dh’fhaodadh eadar-dhealachaidhean anns na buidhnean gnìomh aig eugenol agus methyleugenol leantainn gu diofar phuinnseanan don aon bhiastagan targaid39. Chaidh a lorg gu robh gnìomhachd larvicid meadhanach aig Limonene, agus cha robh buaidh mhòr aig carvone. San aon dòigh, tha puinnseanta ìosal limonene do bhiastagan inbheach agus puinnseanta àrd carvone a’ toirt taic do thoraidhean cuid de sgrùdaidhean roimhe40 ach a’ dol an aghaidh feadhainn eile41. Dh’fhaodadh làthaireachd cheanglaichean dùbailte aig gach cuid suidheachaidhean intracyclic agus exocyclic buannachdan nan todhar sin a mheudachadh mar larvicides3,41, agus dh’fhaodadh gum bi comas nas àirde aig carvone, a tha na ketone le carbons alpha agus beta neo-shàthaichte, airson puinnseanta ann an inbhich42. Ach, tha feartan fa leth limonene agus carvone mòran nas ìsle na an EO Mp iomlan (Clàr 1, Clàr 3). Am measg nan terpenoids a chaidh a dhearbhadh, chaidh a lorg gu robh an gnìomhachd larvicid agus inbheach as motha aig eudesmol le luach LC50 fo 2.5 ppm, ga dhèanamh na cho-thàthadh gealltanach airson smachd a chumail air mosgìotothan Aedes. Tha a choileanadh nas fheàrr na coileanadh an EO Em gu lèir, ged nach eil seo a rèir co-dhùnaidhean Cheng et al.40. Tha Eudesmol na sesquiterpene le dà aonad isoprene a tha nas lugha luaineach na monoterpenes ocsaideanaichte leithid eucalyptus agus mar sin tha comas nas motha aige mar phuinnsean-bhiastagan. Tha gnìomhachd inbheach nas motha aig Eucalyptol fhèin na gnìomhachd larvicidal, agus tha toraidhean bho sgrùdaidhean na bu thràithe a’ toirt taic agus a’ diùltadh seo37,43,44. Tha an gnìomhachd leis fhèin cha mhòr an coimeas ri gnìomhachd an EO Cl gu lèir. Tha buaidh inbheach nas lugha aig monoterpene bicyclic eile, α-pinene, air Aedes aegypti na buaidh larvicidal, a tha na aghaidh buaidh làn EO Cl. Tha gnìomhachd iomlan bhiastagan-mharbhadh terpenoids air a bhuaidh leis an lipophilicity, luaineachd, geugachadh gualain, farsaingeachd ro-mheasaidh, farsaingeachd uachdar, buidhnean gnìomh agus na suidheachaidhean aca45,46. Dh’fhaodadh na todhar sin obrachadh le bhith a’ sgrios cruinneachaidhean cealla, a’ cur bacadh air gnìomhachd analach, a’ cur bacadh air sgaoileadh sparradh neoni, msaa. 47 Chaidh a lorg gu robh an gnìomhachd larbha-mharbhtach as àirde aig an organophosphate synthetigeach Temephos le luach LC50 de 0.43 ppm, a tha a rèir dàta Lek -Utala 48. Chaidh aithris gu robh gnìomhachd inbheach an organophosphate synthetigeach malathion aig 5.44 ppm. Ged a tha an dà organophosphates seo air freagairtean fàbharach a nochdadh an aghaidh sreathan obair-lann de Aedes aegypti, chaidh aithris air strì an aghaidh mosgìotothan an aghaidh nan todhar sin ann an diofar phàirtean den t-saoghal 49. Ach, cha deach aithisgean coltach ri seo a lorg mu leasachadh strì an aghaidh cungaidhean luibheil 50. Mar sin, thathas a’ meas luibh-eòlas mar roghainnean eile an àite puinnseanan ceimigeach ann am prògraman smachd vectar.
Chaidh a’ bhuaidh larbha-mharbhtach a dhearbhadh air 28 measgachadh dà-chànanach (1:1) air an ullachadh bho terpenoids agus terpenoids cumhachdach le thymetphos, agus chaidh 9 measgachadh a lorg synergistic, 14 antagonistic agus 5 antagonistic. Gun bhuaidh. Air an làimh eile, anns a’ bhith-dheuchainn neart inbheach, chaidh 7 measgachadh a lorg synergistic, bha 15 measgachadh antagonistic, agus chaidh aithris nach robh buaidh sam bith aig 6 measgachadh. Is dòcha gur e an adhbhar gu bheil measgachadh sònraichte a’ toirt a-mach buaidh synergistic mar thoradh air na todhar tagraiche ag eadar-obrachadh aig an aon àm ann an diofar shlighean cudromach, no casg sreathmhor air diofar enzyman cudromach de shlighe bhitheòlasach sònraichte51. Chaidh a lorg gu robh an cothlamadh de limonene le diallyl disulfide, eucalyptus no eugenol synergistic ann an tagraidhean beaga is mòra (Clàr 6), agus chaidh a lorg gu robh buaidhean antagonistic aig a chothlamadh le eucalyptus no α-pinene air larbha. Air a’ chuibheasachd, tha coltas gu bheil limonene na dheagh cho-obrachadh, is dòcha air sgàth làthaireachd bhuidhnean methyl, deagh thruailleadh a-steach don stratum corneum, agus dòigh-obrach eadar-dhealaichte52,53. Chaidh aithris roimhe seo gum faodadh limonene buaidhean puinnseanta adhbhrachadh le bhith a’ dol a-steach do chuticles bhiastagan (puinnseanta conaltraidh), a’ toirt buaidh air an t-siostam cnàmhaidh (antifeedant), no a’ toirt buaidh air an t-siostam analach (gnìomhachd smùididh), 54 agus gum faodadh phenylpropanoids leithid eugenol buaidh a thoirt air enzyman metabolach 55. Mar sin, faodaidh measgachadh de choimeasgaidhean le diofar dhòighean-obrach buaidh marbhtach iomlan a’ mheasgachaidh a mheudachadh. Chaidh a lorg gu robh Eucalyptol co-obrachadh le diallyl disulfide, eucalyptus no α-pinene, ach bha measgachadh eile le coimeasgaidhean eile an dàrna cuid neo-larvicidal no antagonistic. Sheall sgrùdaidhean tràtha gu bheil gnìomhachd bacaidh aig eucalyptol air acetylcholinesterase (AChE), a bharrachd air gabhadairean octaamine agus GABA56. Leis gum faodadh an aon dhòigh-obrach a bhith aig monoterpenes cearcallach, eucalyptol, eugenol, msaa. ris a’ ghnìomhachd neurotoxic aca, 57 agus mar sin a’ lughdachadh na buaidhean còmhla aca tro bhacadh dha chèile. San aon dòigh, chaidh a lorg gu robh measgachadh Temephos le diallyl disulfide, α-pinene agus limonene co-obrachail, a’ toirt taic do aithisgean roimhe mu bhuaidh cho-obrachail eadar toraidhean luibheil agus organophosphates synthetigeach 58.
Chaidh faighinn a-mach gu robh buaidh sineirgisteach aig measgachadh eudesmol agus eucalyptol air ìrean larbha is inbheach Aedes aegypti, is dòcha air sgàth an diofar dhòighean gnìomh air sgàth an diofar structaran ceimigeach. Faodaidh Eudesmol (sesquiterpene) buaidh a thoirt air an t-siostam analach 59 agus faodaidh eucalyptol (monoterpene) buaidh a thoirt air acetylcholinesterase 60. Faodaidh co-nochdadh nan tàthchuid ri dà làrach targaid no barrachd buaidh marbhtach iomlan a’ mheasgachaidh a neartachadh. Ann am bioassays stuthan inbheach, chaidh faighinn a-mach gu robh malathion sineirgisteach le carvone no eucalyptol no eucalyptol no diallyl disulfide no α-pinene, a’ nochdadh gu bheil e sineirgisteach le bhith a’ cur limonene agus di ris. Tagraichean aileirdsidh sineirgisteach math airson pasgan iomlan nan todhar terpene, ach a-mhàin allyl trisulfide. Dh’innis Thangam agus Kathiresan61 cuideachd toraidhean coltach ris a’ bhuaidh sineirgisteach aig malathion le earrannan luibhean. Dh’fhaodadh an fhreagairt sineirgisteach seo a bhith mar thoradh air buaidhean puinnseanta malathion agus phytochemicals air einnseanan dì-phuinnseanachaidh bhiastagan. Mar as trice bidh organophosphates leithid malathion ag obair le bhith a’ cur bacadh air cytochrome P450 esterases agus monooxygenases62,63,64. Mar sin, dh’fhaodadh malathion a chur còmhla ris na dòighean gnìomh sin agus terpenes le diofar dhòighean gnìomh a’ bhuaidh mharbhtach iomlan air mosgìotothan a mheudachadh.
Air an làimh eile, tha nàimhdeas a’ comharrachadh gu bheil na todhar taghte nas lugha gnìomhach ann an cothlamadh na gach todhar leotha fhèin. Is dòcha gur e an adhbhar airson nàimhdeas ann an cuid de choimeasgaidhean gu bheil aon todhar ag atharrachadh giùlan a’ cho-thàthaidh eile le bhith ag atharrachadh ìre an glacaidh, an cuairteachaidh, an metabolism no an cuir às. Bha luchd-rannsachaidh tràth den bheachd gur e seo adhbhar nàimhdeas ann an cothlamadh dhrogaichean. Moileciuilean Dòigh-obrach a dh’ fhaodadh a bhith ann 65. San aon dòigh, is dòcha gu bheil adhbharan a dh’ fhaodadh a bhith ann airson nàimhdeas co-cheangailte ri dòighean-obrach coltach ris, farpais choimeasgaidhean co-phàirteach airson an aon gabhadair no làrach targaid. Ann an cuid de chùisean, faodaidh casg neo-fharpaiseach air a’ phròtain targaid tachairt cuideachd. Anns an sgrùdadh seo, sheall dà cho-thàthadh organosulfur, diallyl disulfide agus diallyl trisulfide, buaidhean antagonist, is dòcha mar thoradh air farpais airson an aon làrach targaid. San aon dòigh, sheall an dà cho-thàthadh sulfair seo buaidhean antagonist agus cha robh buaidh sam bith aca nuair a chaidh an cur còmhla ri eudesmol agus α-pinene. Tha eudesmol agus alpha-pinene nan nàdar cearcallach, ach tha diallyl disulfide agus diallyl trisulfide nan nàdar aliphatic. Stèidhichte air an structar ceimigeach, bu chòir do mheasgachadh nan todhar sin an gnìomhachd marbhtach iomlan a mheudachadh leis gu bheil na làraichean targaid aca mar as trice eadar-dhealaichte34,47, ach gu deuchainneach lorg sinn antagonism, a dh’ fhaodadh a bhith mar thoradh air àite nan todhar sin ann an cuid de shiostaman in vivo neo-aithnichte mar thoradh air eadar-obrachadh. San aon dòigh, thug measgachadh de cineole agus α-pinene freagairtean antagonistic, ged a dh’innis luchd-rannsachaidh roimhe gu bheil targaidean gnìomh eadar-dhealaichte aig an dà cho-thàthadh47,60. Leis gu bheil an dà cho-thàthadh nan monoterpenes cearcallach, is dòcha gu bheil cuid de làraichean targaid cumanta ann a dh’ fhaodadh farpais airson ceangal agus buaidh a thoirt air puinnseanta iomlan nam paidhrichean co-mheasgaichte a chaidh a sgrùdadh.
Stèidhichte air luachan LC50 agus bàsmhorachd a chaidh fhaicinn, chaidh an dà cho-mheasgachadh terpene synergistic as fheàrr a thaghadh, is iad sin na paidhrichean de carvone + limonene agus eucalyptol + eudesmol, a bharrachd air an organophosphorus malathion synthetigeach le terpenes. Chaidh an co-mheasgachadh synergistic as fheàrr de choimeasgaidhean malathion + Eudesmol a dhearbhadh ann am bioassay meanbh-bhiastagan inbheach. Targaid coloinidhean mòra bhiastagan gus dearbhadh an urrainn dha na co-mheasgachaidhean èifeachdach seo obrachadh an aghaidh àireamhan mòra de dhaoine fa leth thairis air àiteachan nochdaidh an ìre mhath mòr. Tha na co-mheasgachaidhean seo uile a’ nochdadh buaidh synergistic an aghaidh sgaothan mòra de bhiastagan. Fhuaireadh toraidhean coltach ri chèile airson co-mheasgachadh larvicidal synergistic as fheàrr a chaidh a dhearbhadh an aghaidh sluagh mòr de larbha Aedes aegypti. Mar sin, faodar a ràdh gu bheil an co-mheasgachadh larvicidal agus inbheach èifeachdach de cho-mheasgachaidhean EO planntrais na thagraiche làidir an aghaidh cheimigean synthetigeach a th’ ann mar-thà agus faodar a chleachdadh tuilleadh gus smachd a chumail air sluagh Aedes aegypti. San aon dòigh, faodar co-mheasgachaidhean èifeachdach de larvicidides synthetigeach no inbheach le terpenes a chleachdadh cuideachd gus na dòsan de thymetphos no malathion a tha air an toirt do mosgìotothan a lughdachadh. Dh’fhaodadh na measgachaidhean sineirgisteach cumhachdach seo fuasglaidhean a thoirt seachad airson sgrùdaidhean san àm ri teachd air mean-fhàs strì an aghaidh dhrogaichean ann am mosgìotothan Aedes.
Chaidh uighean Aedes aegypti a chruinneachadh bhon Ionad Rannsachaidh Meidigeach Roinneil, Dibrugarh, Comhairle Rannsachaidh Meidigeach nan Innseachan agus chaidh an cumail fo theodhachd fo smachd (28 ± 1 °C) agus taiseachd (85 ± 5%) ann an Roinn Sò-eòlais, Oilthigh Gauhati fo na cumhaichean a leanas: Chaidh cunntas a thoirt air Arivoli et al. Às deidh dhaibh breith, chaidh biadh larbha (pùdar briosgaid coin agus beirm ann an co-mheas 3: 1) a bhiadhadh do na larbhaichean agus chaidh fuasgladh glùcois 10% a bhiadhadh do na h-inbhich. A’ tòiseachadh air an 3mh latha às deidh dhaibh nochdadh, chaidh leigeil le mosgìotothan boireann inbheach fuil radain albino a shùghadh. Bog pàipear sìoltachain ann an uisge ann an glainne agus cuir e anns a’ chèidse breith uighean.
Sampallan planntrais taghte, is iad sin duilleagan eucalyptus (Myrtaceae), basil naomh (Lamiaceae), mint (Lamiaceae), melaleuca (Myrtaceae) agus bulbaichean allium (Amaryllidaceae). Air an cruinneachadh à Guwahati agus air an comharrachadh leis an Roinn Luibh-eòlais, Oilthigh Gauhati. Chaidh na sampallan planntrais a chaidh a chruinneachadh (500 g) a dhriogadh le bhith a’ cleachdadh inneal Clevenger airson 6 uairean a thìde. Chaidh an EO a chaidh a thoirt a-mach a chruinneachadh ann am fiolan glainne glan agus a stòradh aig 4°C airson tuilleadh sgrùdaidh.
Chaidh puinnseanta larbha-mharbhtach a sgrùdadh le bhith a’ cleachdadh modhan-obrach àbhaisteach Buidheann Slàinte na Cruinne a chaidh atharrachadh beagan 67. Cleachd DMSO mar emulsifier. Chaidh gach dùmhlachd EO a dhearbhadh an toiseach aig 100 agus 1000 ppm, a’ nochdadh 20 larbha anns gach ath-aithris. Stèidhichte air na toraidhean, chaidh raon dùmhlachd a chur an sàs agus chaidh bàsmhorachd a chlàradh bho 1 uair gu 6 uairean (aig eadar-amaichean 1 uair), agus aig 24 uairean, 48 uairean agus 72 uairean às deidh làimhseachadh. Chaidh dùmhlachdan fo-mharbhtach (LC50) a dhearbhadh às deidh 24, 48 agus 72 uairean de nochdadh. Chaidh gach dùmhlachd a dhearbhadh ann an trì leth-bhreac còmhla ri aon smachd àicheil (uisge a-mhàin) agus aon smachd deimhinneach (uisge air a làimhseachadh le DMSO). Ma thachras pupation agus ma gheibh barrachd air 10% de larbha a’ bhuidheann smachd bàs, thèid an deuchainn ath-aithris. Ma tha an ìre bàsmhorachd sa bhuidheann smachd eadar 5-10%, cleachd foirmle ceartachaidh Abbott 68.
Chaidh an dòigh a mhìnich Ramar et al. 69 a chleachdadh airson bio-aiste inbheach an aghaidh Aedes aegypti a’ cleachdadh acetone mar fhuasglaiche. Chaidh gach EO a dhearbhadh an toiseach an aghaidh mosgìotothan inbheach Aedes aegypti aig dùmhlachdan de 100 agus 1000 ppm. Cuir 2 ml de gach fuasgladh ullaichte ris an àireamh Whatman. 1 pìos de phàipear sìoltachain (meud 12 x 15 cm2) agus leig leis an acetone falmhachadh airson 10 mionaidean. Chaidh pàipear sìoltachain air a làimhseachadh le dìreach 2 ml de acetone a chleachdadh mar smachd. Às deidh don acetone falmhachadh, tha am pàipear sìoltachain air a làimhseachadh agus am pàipear sìoltachain smachd air an cur ann an tiùb siolandair (10 cm de dhoimhneachd). Chaidh deich mosgìotothan 3 gu 4 latha a dh'aois nach robh ag ithe fuil a ghluasad gu trì leth-bhreacan de gach dùmhlachd. Stèidhichte air toraidhean dheuchainnean tòiseachaidh, chaidh diofar dùmhlachdan de dh’olan taghte a dhearbhadh. Chaidh bàsmhorachd a chlàradh aig 1 uair, 2 uair, 3 uairean, 4 uairean, 5 uairean, 6 uairean, 24 uairean, 48 uairean agus 72 uairean às deidh leigeil ma sgaoil mosgìotothan. Obraich a-mach luachan LC50 airson amannan nochdaidh de 24 uair, 48 uair agus 72 uair. Ma tha an ìre bàsmhorachd sa bhaidse smachd nas àirde na 20%, ath-aithris an deuchainn gu lèir. San aon dòigh, ma tha an ìre bàsmhorachd sa bhuidheann smachd nas àirde na 5%, atharraich na toraidhean airson nan sampallan a chaidh a làimhseachadh a’ cleachdadh foirmle Abbott68.
Chaidh cromatagrafaidheachd gas (Agilent 7890A) agus speactramaitreachd mais (Accu TOF GCv, Jeol) a dhèanamh gus mion-sgrùdadh a dhèanamh air na co-phàirtean a bha anns na h-olan riatanach taghte. Bha lorgaire FID agus colbh capillary (HP5-MS) anns an GC. B’ e helium a’ ghas giùlain, agus b’ e 1 ml/min an ìre sruthadh. Bidh prògram GC a’ suidheachadh Allium sativum gu 10:80-1M-8-220-5M-8-270-9M agus Ocimum Sainttum gu 10:80-3M-8-200-3M-10-275-1M-5 – 280, airson mint 10:80-1M-8-200-5M-8-275-1M-5-280, airson eucalyptus 20.60-1M-10-200-3M-30-280, agus airson dearg. Airson mìle sreathan is iad sin 10: 60-1M-8-220-5M-8-270-3M.
Chaidh prìomh choimeasgaidhean gach EO a chomharrachadh stèidhichte air a’ cheudad farsaingeachd a chaidh obrachadh a-mach bho thoraidhean cròmatagram GC agus speactramaitreachd mais (air an ainmeachadh ann an stòr-dàta inbhean NIST 70).
Chaidh an dà phrìomh cho-thàthadh anns gach EO a thaghadh stèidhichte air toraidhean GC-MS agus chaidh an ceannach bho Sigma-Aldrich aig purrachd 98–99% airson deuchainnean bith-eòlasach a bharrachd. Chaidh na co-thàthaidhean a dhearbhadh airson èifeachdas larbha-mharbhaidh agus inbheach an aghaidh Aedes aegypti mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd. Chaidh na larbha-mharbhaidh sintéiseach as cumanta tamephosate (Sigma Aldrich) agus an droga inbheach malathion (Sigma Aldrich) a sgrùdadh gus an èifeachdas a choimeas ri co-thàthaidhean EO taghte, a’ leantainn an aon mhodh-obrach.
Chaidh measgachaidhean dà-chànanach de choimeasgaidhean terpene taghte agus choimeasgaidhean terpene a bharrachd air organophosphates malairteach (tilephos agus malathion) ullachadh le bhith a’ measgachadh dòs LC50 gach co-thàthaidh tagraiche ann an co-mheas 1:1. Chaidh na measgachaidhean ullaichte a dhearbhadh air ìrean larbha is inbheach Aedes aegypti mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd. Chaidh gach bioassay a dhèanamh ann an trì leth-bhreac airson gach co-thàthadh agus ann an trì leth-bhreac airson na co-thàthaidhean fa leth a bha an làthair anns gach co-thàthadh. Chaidh bàs nam biastagan targaid a chlàradh an dèidh 24 uairean. Obraich a-mach an ìre bàsmhorachd ris a bheil dùil airson measgachadh dà-chànanach a’ cleachdadh na foirmle a leanas.
far a bheil E = an ìre bàsmhorachd ris a bheil dùil aig mosgìotothan Aedes aegypti mar fhreagairt do chothlamadh dùbailte, i.e. ceangal (A + B).
Chaidh buaidh gach measgachadh dà-chànanach a chomharrachadh mar sineirgisteach, antagonistach, no gun bhuaidh stèidhichte air an luach χ2 a chaidh obrachadh a-mach leis an dòigh a mhìnich Pavla52. Obraich a-mach luach χ2 airson gach measgachadh a’ cleachdadh na foirmle a leanas.
Chaidh buaidh measgachadh a mhìneachadh mar synergistic nuair a bha an luach χ2 obraichte nas motha na luach a’ chlàir airson nan ìrean saorsa co-fhreagarrach (eadar-ama earbsa 95%) agus ma chaidh a lorg gu robh am bàsmhorachd a chaidh fhaicinn nas àirde na am bàsmhorachd ris a bheil dùil. San aon dòigh, ma tha an luach χ2 obraichte airson measgachadh sam bith nas àirde na luach a’ chlàir le cuid de ìrean saorsa, ach gu bheil am bàsmhorachd a chaidh fhaicinn nas ìsle na am bàsmhorachd ris a bheil dùil, thathas den bheachd gu bheil an làimhseachadh antagonistic. Agus ma tha luach obraichte χ2 nas lugha na luach a’ chlàir anns na h-ìrean saorsa co-fhreagarrach ann an measgachadh sam bith, thathas den bheachd nach eil buaidh sam bith aig a’ mheasgachadh.
Chaidh trì gu ceithir measgachaidhean a dh’ fhaodadh a bhith sineirgisteach (100 larbha agus 50 gnìomhachd bhiastagan larbha-mharbhtach is inbheach) a thaghadh airson deuchainnean an aghaidh àireamh mhòr de bhiastagan. Bidh inbhich) a’ dol air adhart mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd. Còmhla ris na measgachaidhean, chaidh deuchainnean a dhèanamh cuideachd air todhar fa leth a bha an làthair anns na measgachaidhean taghte air àireamhan co-ionnan de larbha is inbhich Aedes aegypti. Is e an co-mheas measgachadh aon dòs LC50 pàirt de aon cho-thàthadh tagraiche agus dòs LC50 pàirt den cho-thàthadh eile. Anns a’ bhith-dheuchainn gnìomhachd inbheach, chaidh todhar taghte a sgaoileadh anns an fhuasglaiche acetone agus an cur air pàipear-sìoltachain air a phasgadh ann an soitheach plastaig siolandair 1300 cm3. Chaidh an acetone a ghalachadh airson 10 mionaidean agus chaidh na h-inbhich a leigeil ma sgaoil. San aon dòigh, anns a’ bhith-dheuchainn larbha-mharbhtach, chaidh dòsan de cho-thàthaidhean tagraiche LC50 a sgaoileadh an toiseach ann an tomhas-lìonaidh co-ionnan de DMSO agus an uairsin a mheasgachadh le 1 liotair uisge air a stòradh ann an soithichean plastaig 1300 cc, agus chaidh na larbha a leigeil ma sgaoil.
Rinneadh mion-sgrùdadh coltachd air 71 dàta bàsmhorachd clàraichte a’ cleachdadh SPSS (dreach 16) agus bathar-bog Minitab gus luachan LC50 obrachadh a-mach.
Àm puist: 1 Iuchar 2024