Tha pròtainean DELLA nan maighstirean glèidhteriaghladairean fàisa tha a’ cluich pàirt chudromach ann a bhith a’ cumail smachd air leasachadh lusan mar fhreagairt do chomharran a-staigh agus àrainneachdail. Bidh DELLA ag obair mar riaghlaiche tar-sgrìobhaidh agus thèid a fastadh gu luchd-adhartachaidh targaid le bhith a’ ceangal ri factaran tar-sgrìobhaidh (TFn) agus histone H2A tron raon GRAS aige. Tha sgrùdaidhean o chionn ghoirid air sealltainn gu bheil seasmhachd DELLA air a riaghladh às dèidh eadar-theangachaidh tro dhà dhòigh-obrach: polyubiquitination air a bhrosnachadh leis a’ phytohormone gibberellin, a tha a’ leantainn gu a lobhadh luath, agus co-cheangal atharraichean beaga coltach ri ubiquitin (SUMO) gus a chruinneachadh a mheudachadh. A bharrachd air an sin, tha gnìomhachd DELLA air a riaghladh gu dinamach le dà glycosylation eadar-dhealaichte: tha an eadar-obrachadh DELLA-TF air a neartachadh le O-fucosylation ach air a bhacadh le atharrachadh N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) ceangailte ri O. Ach, chan eil dreuchd fosfaireachadh DELLA soilleir fhathast, leis gu bheil sgrùdaidhean roimhe air toraidhean connspaideach a nochdadh, bho na toraidhean a tha a’ sealltainn gu bheil fosfaireachadh a’ brosnachadh no a’ lughdachadh lobhadh DELLA gu feadhainn eile a tha a’ sealltainn nach eil fosfaireachadh a’ toirt buaidh air a sheasmhachd. An seo, bidh sinn a’ comharrachadh làraichean fosfaireachadh ann an REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) air an glanadh bho Arabidopsis thaliana le mion-sgrùdadh mais-speictreamachd agus tha iad a’ sealltainn gu bheil fosfaraileadh dà pheptide RGA aig roinnean PolyS agus PolyS/T a’ brosnachadh ceangal H2A agus a’ neartachadh gnìomhachd RGA. Ceangal RGA le luchd-adhartachaidh targaid. Gu sònraichte, chan eil fosfaraileadh a’ toirt buaidh air eadar-obrachaidhean RGA-TF no seasmhachd RGA. Tha an sgrùdadh againn a’ nochdadh an dòigh-obrach mhóileciuil leis a bheil fosfaraileadh ag adhbhrachadh gnìomhachd DELLA.
Gus soilleireachadh a dhèanamh air àite fosfaireachadh ann a bhith a’ riaghladh gnìomh DELLA, tha e deatamach làraichean fosfaireachadh DELLA a chomharrachadh in vivo agus mion-sgrùdaidhean gnìomh a dhèanamh ann an lusan. Le bhith a’ glanadh earrannan lusan le dàimh agus an uairsin mion-sgrùdadh MS/MS, chomharraich sinn grunn fosfòsaidean ann an RGA. Fo chumhachan gainnead GA, bidh fosfaireachadh RHA ag àrdachadh, ach chan eil fosfaireachadh a’ toirt buaidh air a sheasmhachd. Gu cudromach, nochd deuchainnean co-IP agus ChIP-qPCR gu bheil fosfaireachadh aig roinn PolyS/T de RGA a’ brosnachadh a eadar-obrachadh le H2A agus a cheangal ri luchd-adhartachaidh targaid, a’ nochdadh an dòigh-obrach leis a bheil fosfaireachadh ag adhbhrachadh gnìomh RGA.
Tha RGA air a fastadh gus cromatin targaideach a tharraing tro eadar-obrachadh fo-àrainn LHR1 le TF agus an uairsin bidh e a’ ceangal ri H2A tro a roinn PolyS/T agus fo-àrainn PFYRE, a’ cruthachadh an iom-fhillte H2A-RGA-TF gus RGA a dhèanamh seasmhach. Bidh fosfaraileadh Pep 2 anns an roinn PolyS/T eadar àrainn DELLA agus àrainn GRAS le kinase neo-aithnichte a’ neartachadh ceangal RGA-H2A. Bidh am pròtain mutant rgam2A a’ cuir às do fhosfaraileadh RGA agus a’ gabhail ri cruth pròtain eadar-dhealaichte gus bacadh a chur air ceangal H2A. Tha seo ag adhbhrachadh neo-sheasmhachd eadar-obrachaidhean TF-rgam2A sealach agus dealachadh rgam2A bho chromatin targaid. Chan eil an fhigear seo a’ sealltainn ach casg tar-sgrìobhaidh le meadhan RGA. Dh’ fhaodadh pàtran coltach ris a bhith air a mhìneachadh airson gnìomhachadh tar-sgrìobhaidh le meadhan RGA, ach a-mhàin gum biodh an iom-fhillte H2A-RGA-TF a’ brosnachadh tar-sgrìobhadh gine targaid agus gum biodh dì-fhosfaraileadh rgam2A a’ lughdachadh tar-sgrìobhaidh. Figear air atharrachadh bho Huang et al.21.
Chaidh a h-uile dàta cainneachdail a sgrùdadh gu staitistigeil le bhith a’ cleachdadh Excel, agus chaidh eadar-dhealachaidhean cudromach a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh deuchainn-t an Oileanaich. Cha deach dòighean staitistigeil sam bith a chleachdadh gus meud an t-sampall a dhearbhadh ro-làimh. Cha deach dàta sam bith a thoirmeasg bhon mhion-sgrùdadh; cha deach an deuchainn a dhèanamh air thuaiream; cha robh an luchd-rannsachaidh dall air sgaoileadh dàta rè an deuchainn agus measadh nan toraidhean. Tha meud an t-sampall air a chomharrachadh ann an uirsgeul an fhigear agus ann am faidhle dàta an stòrais.
Airson tuilleadh fiosrachaidh mu dhealbhadh an sgrùdaidh, faic Geàrr-chunntas Aithisg Portfolio Nàdarra a tha co-cheangailte ris an artaigil seo.
Chaidh dàta pròtaineamaigs speactramaitreachd mais a thoirt do cho-bhanntachd ProteomeXchange tron stòr-dàta com-pàirtiche PRIDE66 leis an aithnichear dàta PXD046004. Tha a h-uile dàta eile a fhuaireadh rè an sgrùdaidh seo air a thaisbeanadh anns an Fhiosrachadh a bharrachd, na faidhlichean dàta a bharrachd, agus na faidhlichean dàta amh. Tha dàta tùsail air a thoirt seachad airson an artaigil seo.
Ùine puist: 8 dhen t-Samhain 2024