Tha pròtainean DELLA air an gleidheadhriaghladairean fàisaig a bheil prìomh àite ann an leasachadh planntrais mar fhreagairt air comharran a-staigh agus a-muigh. Mar riaghladairean tar-sgrìobhaidh, bidh DELLAn a’ ceangal ri factaran tar-sgrìobhaidh (TFn) agus histone H2A tro na raointean GRAS aca agus tha iad air am fastadh gus a bhith an sàs ann an luchd-adhartachaidh. Tha sgrùdaidhean o chionn ghoirid air sealltainn gu bheil seasmhachd DELLA air a riaghladh an dèidh eadar-theangachadh le dà dhòigh: polyubiquitination air adhbhrachadh leis an hormone planntrais.gibberellin, a tha a’ leantainn gu an ìsleachadh luath, agus co-luachadh le mion-atharrachaidh beag coltach ri ubiquitin (SUMO), a tha ag àrdachadh an cruinneachadh. A bharrachd air an sin, tha gnìomhachd DELLA air a riaghladh gu dinamach le dà uidheamachd glycosylation sònraichte: tha O-fucosylation a’ neartachadh eadar-obrachadh DELLA-TF, ach tha atharrachadh N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) ceangailte ri O-ceangailte a’ cur bacadh air eadar-obrachadh DELLA-TF. Ach, chan eil àite phosphorylation DELLA soilleir leis gu bheil sgrùdaidhean roimhe air toraidhean connspaideach a nochdadh, le cuid a’ moladh gu bheil fosphorylation a’ brosnachadh no a’ cuir stad air truailleadh DELLA agus cuid eile a’ moladh nach toir fosphorylation buaidh air an seasmhachd. An seo, bidh sinn a’ comharrachadh làraich fosphorylation anns an repressor GA1-3 (RGA), AtDELLA, air a ghlanadh bho Arabidopsis thaliana le mòr-speactrometry agus a’ sealltainn gu bheil fosphorylation de dhà pheptid RGA anns na roinnean PolyS agus PolyS / T ag àrdachadh gnìomhachd RGA le bhith a’ brosnachadh ceangal H2A agus ceangal RGA le luchd-adhartachaidh targaid. Gu sònraichte, cha tug fosphorylation buaidh air eadar-obrachaidhean RGA-TF no seasmhachd RGA. Tha an sgrùdadh againn a’ nochdadh uidheamachd moileciuil leis am bi fosphorylation ag adhbhrachadh gnìomhachd DELLA.
Nochd ar mion-sgrùdadh mòr-spectrometrach gu robh an dà chuid Pep1 agus Pep2 air an deagh phosphorylated ann an RGA ann an cùl-raon Ga1 le gainnead GA. A bharrachd air an sgrùdadh seo, tha sgrùdaidhean phosphoproteomic cuideachd air nochdadh Pep1 phosphorylation ann an RGA, ged nach deach a dhreuchd a sgrùdadh fhathast53,54,55. An coimeas ri sin, cha deach Pep2 phosphorylation a mhìneachadh roimhe seo leis nach b ’urrainnear am peptide seo a lorg ach a’ cleachdadh an transgene RGAGKG. Ged a bha am mùthadh m1A, a chuir às do phosphorylation Pep1, dìreach beagan lughdachadh air gnìomhachd RGA ann am planntrais, bha buaidh leasachail aige nuair a chaidh e còmhla ri m2A ann a bhith a’ lughdachadh gnìomhachd RGA (Figear Leasachail 6). Gu cudromach, chaidh fosphorylation Pep1 a lughdachadh gu mòr anns an mutant sly1 leasaichte le GA an coimeas ri ga1, a ’moladh gu bheil GA a’ brosnachadh dephosphorylation RGA, a ’lughdachadh a ghnìomhachd. Tha feum air tuilleadh sgrùdaidh air an dòigh anns am bi GA a’ cuir stad air fosphorylation RGA. Is e aon chothrom gum bi seo air a choileanadh tro riaghladh kinase pròtain neo-aithnichte. Ged a tha sgrùdaidhean air sealltainn gu bheil abairt den phròtain CK1 kinase EL1 air a lughdachadh le GA ann an rice41, tha na co-dhùnaidhean againn a’ nochdadh nach bi mùthaidhean òrdugh nas àirde den homologue Arabidopsis EL1 (AEL1-4) a’ lughdachadh fosphorylation RGA. Ann an co-chòrdadh ris na co-dhùnaidhean againn, cha do chomharraich sgrùdadh phosphoproteomic o chionn ghoirid a’ cleachdadh loidhnichean overexpressing Arabidopsis AEL agus mutant triple ael pròtanan DELLA sam bith mar fho-stratan de na kinases sin56. Nuair a dheasaich sinn an làmh-sgrìobhainn, chaidh aithris gum faod GSK3, an gine a tha a’ còdachadh kinase coltach ri GSK3/SHAGGY ann an cruithneachd (Triticum aestivum), fosphorylate DELLA (Rht-B1b)57, ged nach deach fosphorylation de Rht-B1b le GSK3 a dhearbhadh ann am planntrais. Nochd ath-bhualaidhean enzymatic in vitro ann an làthaireachd GSK3 agus an uairsin mion-sgrùdadh mòr-speactrometry trì làraich fosphorylation a tha suidhichte eadar raointean DELLA agus GRAS de Rht-B1b (Fig. 3 Leasachail). Mar thoradh air luchd-ionaid serine gu alanine aig na trì làraich phosphorylation lughdaich gnìomhachd Rht-B1b ann an cruithneachd transgenic, a rèir ar co-dhùnaidhean gun do lughdaich luchd-ionaid alanine ann am Pep2 RGA gnìomhachd RGA. Ach, sheall measaidhean truailleadh pròtain in vitro tuilleadh gum faod fosphorylation Rht-B1b57 a dhèanamh seasmhach cuideachd. Tha seo eadar-dhealaichte bho na toraidhean againn a tha a’ sealltainn nach eil luchd-ionaid alanine ann am Pep2 RGA ag atharrachadh a sheasmhachd ann am plannta. Tha GSK3 ann an cruithneachd na ortholog de phròtain neo-mhothachail brassinosteroid 2 (BIN2) ann an Arabidopsis 57. Tha BIN2 na riaghlaiche àicheil air comharran BR, agus bidh BR a’ gnìomhachadh a shlighe comharran le bhith ag adhbhrachadh truailleadh BIN2 58. Sheall sinn nach eil làimhseachadh BR a’ lughdachadh seasmhachd RGA 59 no ìrean fosphorylation ann an Arabidopsis (S2) fosphorylated le BIN2.
Chaidh mion-sgrùdadh staitistigeil a dhèanamh air a h-uile dàta cainneachdail a’ cleachdadh Excel, agus chaidh eadar-dhealachaidhean mòra a dhearbhadh a’ cleachdadh deuchainn-t nan Oileanach. Cha deach dòighean staitistigeil a chleachdadh gus meud sampall a dhearbhadh ro-làimh. Cha deach dàta sam bith a chuir a-mach às an anailis; cha deach an deuchainn a dhèanamh air thuaiream; agus bha an luchd-rannsachaidh mothachail air an riarachadh rè an deuchainn agus measadh builean. Tha meudan sampall air an toirt seachad anns na h-uirsgeulan figear agus anns na faidhlichean dàta amh.
Ùine puist: Giblean-15-2025